新城疫病毒(AIV-U/NDV)試劑盒(雙重?zé)晒?PCR法)為上海滬崢主要產(chǎn)品，其特點(diǎn)靈敏性高 、特異性高，判斷陰陽性結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)，廠家供貨，品質(zhì)保證，價(jià)格優(yōu)惠,歡迎來電咨詢！

產(chǎn)品名稱：新城疫病毒(AIV-U/NDV)試劑盒(雙重?zé)晒?PCR法)

英文名稱：Diagnostic Kit for AIV-U/NDV) Gene DNA (Real-Time PCR Method)

包裝：50T

預(yù)期用途】本試劑盒適用于檢測(cè)/新城疫病毒(AIV-U/NDV)基因，用于篩查待檢測(cè)植物中是否含有AIV-U/NDV)成分。其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

【檢驗(yàn)原理】本試劑盒用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的 hLTF 特異性引物和探針，用熒光 PCR 技術(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)基因成分的檢測(cè)。

【試劑組成】

說明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

【儲(chǔ)存條件及有效期】-20℃避光保存、運(yùn)輸、避免反復(fù)凍融，反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次。有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

【標(biāo)本采集】稱取 200g 樣品。

【保存和運(yùn)輸】上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過 6 個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 0℃冰壺。

【使用方法】. 樣品處理（樣本處理區(qū)）樣本前處理

固體樣本：用粉碎機(jī)或冷凍研磨儀將樣品研磨至細(xì)粉狀。

2 DNA 提取

對(duì)于固體標(biāo)本，DNA 的提取可以采用 SN/T 2584-2010 中推薦的方法：

1) 每個(gè)樣品取 2 個(gè)平行管。稱取 200mg 粉碎的樣品，加入 1mL 預(yù)冷至 4℃的抽提液，劇烈搖動(dòng)混勻后，在冰上靜止 5min，4℃條件下 10000g 離心 15min，棄上清液；

2) 加入 600μL 預(yù)熱至 65℃的裂解液，充分重懸沉淀，在 65℃恒溫保持 40min， 期間顛倒混勻 5 次；

3) 室溫條件下10000g 離心10min，取上清液轉(zhuǎn)移至新離心管中，加入5μLRNAseA， 37℃恒溫 30min，分別用等體積苯酚：異戊醇溶液和*：異戊醇溶液各抽提一次；

4) 室溫條件下，10000g 離心 10min，取上清液至新離心管，加入三分之二體積的異丙醇，十分之一體積的 3mol/L 的乙酸鈉溶液（pH=6.5），-20℃放置 2-3h；

5) 在 4℃條件下，10000g 離心 15min，棄上清液，用 70%乙醇洗滌沉淀一次，倒出乙醇，晾干沉淀；

6) 加入 50μL TE（pH8.0）溶解沉淀，所得溶解即為樣品 DNA 溶液。也可使用等效的 DNA 提取試劑盒。

油脂樣本請(qǐng)直接選用市售油脂 DNA 提取試劑盒，按說明操作。

試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽性對(duì)照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

PCR反應(yīng)五要素：

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物： 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。

將四個(gè)工作標(biāo)準(zhǔn)品的濃度輸入，F(xiàn)1（FAM）和 F2(HEX)通道選擇樣點(diǎn)擬合法進(jìn)行分析，F(xiàn)1(FAM)通道基線 （零點(diǎn)調(diào)整）取為 12—14 個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)，F(xiàn)2(HEX)通道基線（零點(diǎn)調(diào)整）取為 23—25 個(gè)循環(huán)的熒光信 號(hào)，噪聲容限以基線超過正常陰性對(duì)照品擴(kuò)增曲線（無規(guī)則的噪音線）的*點(diǎn)，或根據(jù)儀器噪音情況另行 調(diào)整,并且基線調(diào)整的位置在 0.5-5 的范圍內(nèi)，然后進(jìn)行定量分析。 2 檢測(cè)樣本中 1×103 IU/ml≤HBV DNA≤1×108 IU/ml，測(cè)定結(jié)果有效，可直接報(bào)告陽性及相應(yīng)的拷貝量； 3 檢測(cè)樣本中 HBV DNA＞1×108 IU/ml，即可直接報(bào)告為＞1×108 IU/ml，也可用正常人 HBV DNA 陰性血清按 10 倍梯度做相應(yīng)稀釋，使其拷貝量落在 1×105 —5×107 IU/ml 范圍內(nèi)再重新測(cè)定，測(cè)定結(jié)果應(yīng)以稀釋倍數(shù)進(jìn) 行校正； 4 檢測(cè)樣本 HBV DNA 的拷貝量為 1×102 ~1×103 IU/ml 時(shí)，建議對(duì)該樣本進(jìn)行雙份重試，如雙份樣本重試仍 在 1×102 ~1×103 IU/ml，則按實(shí)際值計(jì)算，如雙份或一份重試均＜1×102 IU/ml，則判斷為陰性； 5 Ct 值不顯示時(shí)或 HBV DNA 的拷貝量＜1×102 IU/ml，該樣本 HBV DNA 為陰性。

公司產(chǎn)品涵蓋ELISA研發(fā)、PCR試劑盒，細(xì)胞培養(yǎng)，各種生化試劑、各種酶類、分子生物學(xué)試劑盒、培養(yǎng)基、自產(chǎn)實(shí)驗(yàn)室耗材、小型儀器等。此外、上海滬崢還代理了sigma,R&D,ScienCell,ATCC,wak0,omega，Worthington、MBI、Bioworld、Calendon等國(guó)外各類*公司的產(chǎn)品。