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| 產(chǎn)地 | 國(guó)內(nèi) |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號(hào) | HZT2455 |
| 用途 | 僅用科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
| 純度 | 詳詢客服% |
| CAS編號(hào) | |
| 是否進(jìn)口 |
基本原理 先用隨機(jī)引物將 RNA 反轉(zhuǎn)錄成 cDNA，然后設(shè)計(jì)特異性的引物和熒光探針(TaqMan 探針),進(jìn)行 熒光定量 PCR 檢測(cè)。TaqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它設(shè)計(jì)為與目標(biāo)序列上游引物和下游引物 之間的序列配對(duì)。熒光基團(tuán)連接在探針的 5’末端，而淬滅劑則在 3’末端。當(dāng)完整的探針與目 標(biāo)序列配對(duì)時(shí)，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與 3’端的淬滅劑接近而被淬滅，但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí)， qTaq 聚合酶的 5’外切酶活性將探針進(jìn)行酶切，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離,熒光強(qiáng)度得到檢測(cè)。 隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來(lái)的熒光基團(tuán)不斷積累，因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
注意事項(xiàng):
1. 試劑盒各組份使用前請(qǐng)充分融化并搖勻,離心管內(nèi)的試劑需離心數(shù)秒后使用。 2 PCR操作各階段應(yīng)在不同實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。
3 在試劑和標(biāo)本準(zhǔn)備階段使用負(fù)壓超凈臺(tái)。
4 應(yīng)穿工作服，戴一次性手套（經(jīng)常替換手套），使用一次性用品。
5 PCR操作人員應(yīng)具有經(jīng)驗(yàn)和受過(guò)培訓(xùn)。
6操作過(guò)程中用到的超凈臺(tái)、移液器、離心機(jī)、擴(kuò)增儀等儀器設(shè)備應(yīng)經(jīng)常用10%次氯酸或70%乙醇或 紫外燈處理。
7 陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)和待檢標(biāo)本平行進(jìn)行操作后方可進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
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