|
| 產(chǎn)地 | 國內(nèi) |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HXG515 |
| 用途 | 僅限科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
| 純度 | 詳詢客服% |
| CAS編號 | |
| 是否進(jìn)口 | 否 |
豬水皰性口炎(VSV)*試劑盒(熒光-PCR法)
本試劑盒用一對豬水皰性口炎(VSV)特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對日豬水皰性口炎(VSV)核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于對可疑感染者的病原學(xué)診斷。
【儲存條件及有效期】
-20℃避光保存、運(yùn)輸、避免反復(fù)凍融，有效期12個(gè)月。
【適用儀器】
ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀。
【保存和運(yùn)輸】
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過6個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰壺。
豬水皰性口炎(VSV)*試劑盒(熒光-PCR法)【使用方法】
1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1 樣本前處理
組織：取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿，勻漿后置入潔凈的1.5ml離心管中；
液體標(biāo)本：取適量標(biāo)本13000rpm離心2min，棄上清。
1.2 DNA提取
1) 對上述處理好的標(biāo)本加入40ul 核酸提取液，100℃恒溫處理10分鐘，13,000 rpm離心5分鐘，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5ml EP管，-20℃保存；
2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
根據(jù)代檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N（N=樣本數(shù)+1
管陰性對照+1管陽性對照），體系配制如下表：
試劑
WSSV 反應(yīng)液
酶液
用量（樣本數(shù)為N）
20μl
1μl
3. 加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟1提取的DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μl，加入相應(yīng)的
反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4. PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi)；
5. 結(jié)果分析判定
結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置基線（baseline）：一般情況下，對ABI 7500、7700等儀器設(shè)為6-15cycle，對PE5700設(shè)為3-15cycle,對MJ Research Option2設(shè)為6-12cycle。特殊情況可對基線適當(dāng)調(diào)整。
設(shè)置閾值（threshold）:以閾值線剛超過陰性對照擴(kuò)增曲線（無規(guī)則的噪音線）的zui高點(diǎn)。
結(jié)果判斷
陽性：檢測樣本Ct值小于等于35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長期；
可疑：檢測樣本Ct值大于35.0且小于40.0，重復(fù)一次實(shí)驗(yàn)，如果Ct值仍小于40.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長期，為陽性，否則為陰性；
陰性：檢測不到樣本Ct值或Ct值為40。
試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。.
全能核酸酶在非常廣泛的條件下，都能保持很高的穩(wěn)定性和消化核酸的活性，這使其能夠與多種細(xì)胞裂解液，如RIPA，或含有多種離子和非離子型去污劑、還原劑的蛋白提取試劑等兼容。例如：>100mM的鹽酸胍會完全抑制Benzonase活性，1mM的EDTA會部分抑制Benzonase活性，5mM的EDTA會使活性喪失90%，1mM的PMSF則不會抑制核酸酶活性。 濃度<0.4%的Triton® X-100對核酸酶活性幾乎無影響，<0.4%的脫氧膽酸鈉使核酸酶可保持70%的活性，超過該臨界值之后核酸酶活性會急劇降低，1%的濃度會使活性喪失70%；0.05%的SDS對核酸酶活性幾乎無影響，而SDS濃度在0.1%-1%之間時(shí)，核酸酶在變性后活性會急劇降低，可通過增加核酸酶的量使活性得到補(bǔ)償。另外，核酸酶可耐受6M尿素，當(dāng)尿素達(dá)到7M時(shí)，核酸酶在變性后活性會急劇降低，亦可通過增加核酸酶的量
|
|
|
|
|
|
