【產(chǎn)品名稱】

商品名稱：禽呼腸孤病毒(ARV)檢測試劑盒（熒光-PCR法）

【包裝規(guī)格】50 份/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測的血清或血漿、疑似污染 REV 的活病

毒疫苗等標(biāo)本中禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒 RNA，適用于禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病

毒感染的輔助診斷。其檢測結(jié)果僅供參考。

禽呼腸孤病毒(ARV)檢測試劑盒（熒光-PCR法）【檢驗(yàn)原理】

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【標(biāo)本采集】

水樣便取 0.5~1mL；疑似污染的食物取 1g

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1 樣本前處理

水樣便 13000rpm 離心 2min，去盡上清；疑似污染的食物用手術(shù)剪剪碎混勻后取0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；疑似污染的水直接取 100μL

1.2 DNA 提取

1) DNA 的提取也可以采用DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

本試劑盒用一對禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光

探針，用一步法熒光 RT-PCR 技術(shù)對禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒 RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)

增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

名 稱 規(guī) 格

酶液 50μl×1 管

REV 反應(yīng)液 1.0ml×1 管

REV 陽性質(zhì)控品 50μl ×1 管

陰性質(zhì)控品 250μl ×1 管

說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

禽呼腸孤病毒(ARV)檢測試劑盒（熒光-PCR法）結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結(jié)果。

1.2 結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線；

可疑：檢測通道 35 值≤38，建議重復(fù)檢測，如果檢測通道仍為 35 值≤38， 且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值。

2. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：Ct 值>38 或無 Ct 值；

陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經(jīng)常是60°C左右）時引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補(bǔ)鏈。基于聚合酶制造的PCR儀實(shí)際就是一個溫控設(shè)備，能在變性溫度，復(fù)性溫度，延伸溫度之間很好地進(jìn)行控制。

實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程， 通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

【注意事項(xiàng)】

? 所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行；

? 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完全混勻并短暫離心；

? 反應(yīng)液應(yīng)避光保存；

? 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

? 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

? 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染；

? 實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

? 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通 則》進(jìn)行處理。