【產品名稱】

商品名稱：禽傳染性法氏囊病毒(IBDV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

【包裝規格】50 份/盒

【預期用途】

本試劑盒適用于檢測的血清或血漿、疑似污染 REV 的活病

毒疫苗等標本中禽網狀內皮組織增殖病病毒 RNA，適用于禽網狀內皮組織增殖病病

毒感染的輔助診斷。其檢測結果僅供參考。

禽傳染性法氏囊病毒(IBDV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)【檢驗原理】

本試劑盒用一對禽網狀內皮組織增殖病病毒特異性引物，結合一條特異性熒光

探針，用一步法熒光 RT-PCR 技術對禽網狀內皮組織增殖病病毒 RNA 進行體外擴

增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

【試劑組成】

名 稱 規 格

酶液 50μl×1 管

REV 反應液 1.0ml×1 管

REV 陽性質控品 50μl ×1 管

陰性質控品 250μl ×1 管

說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

1.1 結果分析條件設定

設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現整體傾斜時，根據分析后圖像調節Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。

1.2 結果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數增長曲線；

可疑：檢測通道 35 值≤38，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 35 值≤38， 且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測結果 Ct 值>38 或無 Ct 值。

2. 質控標準

陰性質控品：Ct 值>38 或無 Ct 值；

陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：

①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數 個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。

 

 

【注意事項】

? 所有操作嚴格按照說明書進行；

? 試劑盒內各種組分使用前應自然融化，完全混勻并短暫離心；

? 反應液應避光保存；

? 反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

? 使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服；

? 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行，以免交叉污染；

? 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

? 試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通 則》進行處理。

禽傳染性法氏囊病毒(IBDV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)【注意事項】

所有操作嚴格按照說明書進行；
試劑盒內各種組分使用前應自然融化，混勻并短暫離心；
反應液應避光保存；
反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服；
樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行，以免交叉污染；
實驗完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；
試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。.