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| 產(chǎn)地 | 國內(nèi) |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號(hào) | HZT0447 |
| 用途 | 限科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
| 純度 | 詳詢客服% |
| CAS編號(hào) | |
| 是否進(jìn)口 | 否 |
上海滬崢專業(yè)生產(chǎn)銷售變形絲囊霉菌PCR試劑盒現(xiàn)貨，
本試劑盒引物經(jīng)過優(yōu)化，反應(yīng)特異性強(qiáng)，即開即用，歡迎新老客戶咨詢訂購。，本試劑盒引物經(jīng)過優(yōu)化，反應(yīng)特異性強(qiáng)，即開即用，歡迎新老客戶咨詢訂購。
產(chǎn)品詳細(xì)信息
中文名稱：變形絲囊霉菌PCR試劑盒
英文名稱：Aphanomyces astaci
產(chǎn)品規(guī)格：50T/盒
用途】用于變形絲囊霉菌的檢測、診斷和流行病學(xué)調(diào)查。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過5次，有效期12個(gè)月。
提示：本品僅用于科研實(shí)驗(yàn)，不能用作醫(yī)療及臨床診斷。
變形絲囊霉菌PCR試劑盒使用方法
1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1 樣本前處理
組織樣品：每份組織分別從3個(gè)不同的位置稱取樣品約1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中；液體樣品，直接取100μL提取
1.2 DNA提取
1) DNA的提取也可以采用（離心柱提取法），請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。
2. 加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟1提取的DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
3. PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi)；
4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為25μL；
熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列儀器請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光，選擇None即可。
4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
步驟 | 循環(huán)數(shù) | 溫度 | 時(shí)間 | 收集熒光信號(hào) |
1 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
2 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
4. 結(jié)果分析判定
5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置Baseline和Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline的start值(一般可在3~15范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop值(一般可在5~20范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及Threshold的Value值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照)，重新分析結(jié)果。
5.2 結(jié)果判斷
陽性：檢測通道Ct值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線；
可疑：檢測通道35<Ct值≤38，建議重復(fù)檢測，如果檢測通道仍為35<Ct值≤38，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；
陰性：樣本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。
5. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品：Ct>38或無Ct值顯示；
陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期，且Ct值≤32；
以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。
6. 檢測方法的局限性
? 樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；
? 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果；
? 陽性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果；
? 病原體在流行過程中基因突變、重組，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
? 不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
? 試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果；
? 本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。
變形絲囊霉菌PCR試劑盒
◆ 注意事項(xiàng)
1．本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染，實(shí)驗(yàn)要分區(qū)操作。
1）*區(qū)：樣本制備區(qū)。
2）*區(qū)：模板添加區(qū)。
3）第三區(qū)：擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)。
★ 分區(qū)之間*進(jìn)行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。
2．實(shí)驗(yàn)過程中穿戴工作服和乳膠手套，不同區(qū)域獨(dú)立使用工具，需更換手套和實(shí)驗(yàn)服。
3．嚴(yán)格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請(qǐng)嚴(yán)格按照說明書要求在冰盒上操作。
4．反應(yīng)液中的成分對(duì)光敏感，應(yīng)避光保存。試劑使用前要完全解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，推薦使用前離心30秒，并按檢測頻次將反應(yīng)液以適當(dāng)體積分管保存。
5．反應(yīng)結(jié)束后，擴(kuò)增管請(qǐng)置于密封袋內(nèi)丟棄，當(dāng)日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。
6．不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。
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