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| 產(chǎn)地 | 國內(nèi) |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HZW0700 |
| 用途 | 僅限科研 |
| 包裝規(guī)格 | 48T/盒 |
| 純度 | 詳詢客服% |
| CAS編號 | |
| 是否進口 |
甲型流感病毒(IAV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法
操作步驟
1 病毒 RNA 的提取
1.1 取已處理的樣品、陰性對照和陽性對照，分別加入裂解液 600 μL，充分顛倒混勻，室溫靜置 3～
5 min。
1.2 將液體吸入吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液體時盡量不要吸到懸浮雜質(zhì)，以免離心時 堵塞吸附柱），13000 rpm 離心 30 s。
1.3 棄去收集管中液體，加入 600 μL 洗液，13000 rpm 離心 30 s。
1.4 重復(fù)步驟 1.3。
1.5 棄去收集管中液體，13000 rpm 空柱離心 2 min，以除去殘留的洗滌液。
1.6 將吸附柱移入新的 1.5 mL 離心管中，向柱中央加入洗脫液 50 μL，室溫靜置 1 min，13000 rpm
離心 30 s，離心管中液體即為模板 RNA。
2 實時熒光 RT-PCR 操作
設(shè)被檢樣品、陰性對照和陽性對照總和為 N，則反應(yīng)體系配制如下： 試劑 體系
無菌無核酸酶水 2.7（N+1）μL
RT-PCR 反應(yīng)液 10（N+1）μL
酶混合液 0.4（N+1）μL
熒光探針 1.9（N+1）μL
將以上配制的反應(yīng)體系充分混勻后，分裝每個反應(yīng)管中各 15 μL。
分別取 5 μL 模板 RNA，加入相應(yīng)反應(yīng)管中，混勻并作好標(biāo)記，在熒光 PCR 儀上進行以下反應(yīng)：
45 ℃ 15 min，95 ℃ 1min；95 ℃ 5 s，60 ℃ 35 s，在每個循環(huán)第二步（60℃ 35s）收集熒光信號，共
40 個循環(huán)。（報告基團“FAM”，淬滅基團“None”）。
結(jié)果判定
1 結(jié)果分析條件設(shè)定 閾值設(shè)定原則：閾值線設(shè)定于剛好超過陰性對照擴增曲線的點。不同儀器可根據(jù)儀器噪音
情況進行調(diào)整。
甲型流感病毒(IAV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法2 結(jié)果描述及判定
【參考值（參考范圍）】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽性對照：有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。
（2）陰性對照：Ct值＞38或無Ct值，線形為直線或輕微斜線，無指數(shù)增長期。
2.標(biāo)本結(jié)果判定：
（1）陽性：標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。
（2）可疑：標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值在35～38范圍內(nèi)。此時應(yīng)對標(biāo)本進行重復(fù)檢測，如重復(fù)實驗結(jié)果Ct值仍在35～38范圍內(nèi)，有明顯指數(shù)增長期，則判定為陽性，否則為陰性。
（3）陰性：標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值＞38或無Ct值。
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