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| 產(chǎn)地 | 國(guó)產(chǎn) |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號(hào) | HZ-75251 |
| 用途 | |
| 包裝規(guī)格 | 50T |
| 純度 | % |
| CAS編號(hào) | |
| 是否進(jìn)口 | 否 |
上海滬崢專業(yè)生產(chǎn)銷售新型鴨病毒性肝炎一步法RT-PCR診斷試劑盒現(xiàn)貨，我公司供應(yīng)的分子生物學(xué)試劑品類齊全，且具有優(yōu)勢(shì)價(jià)格，歡迎新老客戶咨詢認(rèn)購(gòu)。
產(chǎn)品詳細(xì)信息
名稱：新型鴨病毒性肝炎一步法RT-PCR診斷試劑盒
規(guī)格： 20T/50T
品牌：上海滬崢
【用途】 用于鴨病毒性肝炎的檢測(cè)、診斷和流行病學(xué)調(diào)查。
【操作步驟】
1.RNA提取
(1) 取疑似鴨病毒性肝炎的病料（*、*、淋巴結(jié)等）1~4g于無(wú)菌研缽，研磨并用PBS液（pH7.2~7.4）稀釋成1：4乳劑，分裝1.5ml滅菌EP管，反復(fù)凍融2~3次，8000r/min離心5分鐘。（病毒培養(yǎng)液，只需凍融1次即可8000r/min離心5分鐘）
（2）取200uL上清液（或標(biāo)準(zhǔn)品Ｔ），移入新的1.5mL滅菌EP管中，加入200uLSR-I，漩渦振蕩混合均勻，靜置5min。
（3）加75uL TU-1，漩渦振蕩混合均勻，10000r/min離心5 min。
（4）將上清轉(zhuǎn)移到新的2 ml離心管（試劑盒內(nèi)提供）中，加入300 uL 異丙醇（1%冰乙酸），上下倒置6-8次，混合均勻。
（5）將步驟4中的混合液移入制備管中，并將制備管置于同一2 ml離心管，10000 r/min離心1min。
（6）棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，加500 uL SR-II，室溫靜置1min，10000 r/min離心1 min。
（7）棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，加700 uL SR-Ⅲ，10000 r/min離心1 min。
（8）將制備管置回到2 ml離心管中，10000 r/min離心1 min。
（9） 將制備管置于潔凈的1.5 ml離心管中（試劑盒內(nèi)提供），在制備管膜中央加40 uL TU-2， 室溫靜置1 min。10000 r/min離心1 min洗脫。洗脫液即為模板，即用或-70℃凍存?zhèn)溆谩?/p>
3 .PCR操作
4.電泳
配制1%瓊脂糖凝膠，取PCR產(chǎn)物5uL混合1uL TU-8，加樣于凝膠孔中，同時(shí)在相鄰孔加3uLTU-7，在120v 電壓下，1×TAE液中電泳15分鐘，在紫外成像儀下觀察結(jié)果。
新型鴨病毒性肝炎一步法RT-PCR診斷試劑盒
【注意事項(xiàng)】
1. 每次使用，開蓋之前請(qǐng)先瞬時(shí)離心，使試劑沉于管底。
2. 所有試劑在要求溫度下保存，-20℃保存試劑盡量減少反復(fù)凍融，使用后的試劑立即放回，避免在室溫?cái)R置太久。
3. 盡量建立PCR試驗(yàn)操作區(qū)，避免交叉污染。
4. 加樣和反應(yīng)程序嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行，由于操作失誤、移液器不精確、定時(shí)不準(zhǔn)確造成無(wú)結(jié)果情況，不予負(fù)責(zé)。
5. 吸頭、離心管和PCR管在使用前，要高壓滅菌，操作過(guò)程盡量不要用手接觸到管內(nèi)壁，可用鑷子夾取。
6. 注意防止試劑污染，在有效期限前用完。
血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
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